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      如何設(shè)計(jì)高效的植物sgRNA進(jìn)行基因編輯

      發(fā)布時(shí)間:2016-04-05
      來(lái)源:科技外事處

        基于CRISPR/Cas9-sgRNADNA編輯系統(tǒng)已經(jīng)發(fā)展成基因編輯的一個(gè)有效工具。CRISPR/Cas9-sgRNA系統(tǒng)包含兩個(gè)主要組分—Cas9蛋白和sgRNAsgRNA決定了基因編輯的位點(diǎn)和基因編輯的效率。研究已經(jīng)表明,不同的sgRNA有不同的編輯效率。在動(dòng)物和人類中通過(guò)高通量比較分析sgRNA的效率,研究人員已經(jīng)獲得了高效sgRNA的參數(shù)。與動(dòng)物的細(xì)胞系轉(zhuǎn)染不同,植物sgRNA介導(dǎo)的編輯效率需要在轉(zhuǎn)基因后代中驗(yàn)證,因此,目前已報(bào)道的有效編輯的植物sgRNA僅有幾百個(gè)。由于無(wú)效的植物sgRNA直接浪費(fèi)科研人員的時(shí)間和金錢,因此選擇高效率的sgRNA是避免該結(jié)果發(fā)生的一個(gè)有效途徑。 

            版納植物園植物分子生物學(xué)研究組的梁崗博士等通過(guò)分析已有的有效和無(wú)效的sgRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu),獲得了直接控制sgRNA效率的關(guān)鍵參數(shù)。同時(shí),針對(duì)目前構(gòu)建多靶點(diǎn)CRISPR/Cas9-sgRNA載體的成功率較低的現(xiàn)狀,開發(fā)了一個(gè)高效的構(gòu)建多靶點(diǎn)CRISPR/Cas9-sgRNA載體的策略。通過(guò)該策略,將符合高效sgRNA參數(shù)的20多個(gè)sgRNA組裝進(jìn)不同的CRISPR/Cas9-sgRNA載體。在水稻中,對(duì)這些sgRNA的編輯效率進(jìn)行了驗(yàn)證。結(jié)果表明,符合規(guī)定參數(shù)的sgRNA可以有效地對(duì)靶基因進(jìn)行編輯。該研究成果為科研人員選擇高效的植物sgRNA提供了參考。相關(guān)研究結(jié)果,以Selection of highly efficient sgRNAs for CRISPR/Cas9-based plant genome editing為題,發(fā)表在Scientific Reports上。

      本文作者:梁崗

      責(zé)任編輯:張維靜_151c53
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