胡蜂毒腺內(nèi)新多肽的鑒定和活性研究
抗菌肽(AMP)是細菌、植物、昆蟲和脊椎動物體內(nèi)合成的小分子化合物,能夠抵抗病原菌的感染。這些肽的大小有10到40個氨基酸,并顯示陽離子和兩親性特征。陽離子AMP與帶負電荷的細菌外膜相互作用,從而破壞膜結(jié)構(gòu),這一特性使得AMP具有良好的抗菌活性,并且無耐藥性。因此,AMP可能成為新型抗感染藥物的潛在來源。在體內(nèi)合成AMP是節(jié)肢動物抵御微生物入侵的重要方式之一,胡蜂高度專化的毒腺中具有豐富的藥理活性肽,具有巨大的醫(yī)學開發(fā)價值。
版納植物園化學生態(tài)研究組碩士研究生孟義川和溫心馨在譚墾研究員的指導下,與昆明醫(yī)科大學合作,利用構(gòu)建cDNA文庫的方式,在凹紋胡蜂(Vespa velutina)毒囊中鑒定出了四種新型多肽(Vp1a、Vp1b、Vp2a、Vp2b)。抗菌、抗氧化以及溶血實驗顯示,Vp1b在120 μM濃度下,對金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和大腸桿菌(Escherichia coli)具有良好的抑制效果;四種多肽在120 μM濃度下對自由基具有明顯的清除作用;新多肽均沒有溶血活性,意味著對紅細胞沒有破壞作用。實驗結(jié)果表明新多肽具有良好的抗菌性和抗氧化性。
另外,從黑尾虎頭蜂(Vespa ducalis)、紅娘虎頭蜂(Vespa mandarinia)和黃腰虎頭蜂 (Vespa affinis)的毒液中分離和純化出了五種新型胡蜂抗菌肽(Vm1a、Vm1b、Vm1c、Vm1d、Vm1e)。利用生物信息手段,發(fā)現(xiàn)五種新型AMPs具有典型抗菌肽的結(jié)構(gòu)和特征:α-螺旋結(jié)構(gòu)和兩親性特征。通過最小抑菌濃度法測得,五種新肽在不同濃度下均具有廣譜殺菌性和抗真菌的功能。溶血實驗表明,五種新肽均未表現(xiàn)出溶血性和強毒性。在此基礎(chǔ)上,研究人員對其潛在的抗菌機制進行了初步探索,發(fā)現(xiàn)試供菌體細胞膜的完整性遭到了破壞,其基因組DNA產(chǎn)生降解。這種獨特的作用機制對新肽不易產(chǎn)生耐藥性至關(guān)重要。
相關(guān)研究結(jié)果分別以New bioactive peptides from the venom gland of a social hornetVespa velutina和Functional characterization, antimicrobial effects, and potential antibacterial mechanisms of new mastoparan peptides from hornet venom (Vespa ducalis,Vespa mandarinia, andVespa affinis)為題發(fā)表在了Toxicon雜志上,兩項工作均得到了國家自然科學基金的支持。
圖1. 新多肽對DPPH自由基的清除效果
圖2. Vm1a的預測結(jié)構(gòu)和疏水性